灣區(qū)時訊（編輯/劉秀 通訊員/曾河坤） 日前，暨南大學(xué)藥學(xué)院聶紅教授團(tuán)隊揭示了重樓的主要活性成分——重樓皂苷VI及其改善炎癥性疼痛的基礎(chǔ)上，進(jìn)一步探索重樓皂苷VI對NPP的鎮(zhèn)痛及作用機(jī)制研究，相關(guān)成果以“PolyphyllinVI alleviates the spared nerve injury-induced neuropathic pain based on P2X3 receptor-mediated the release of inflammatory mediators”為題，在國際藥理學(xué)研究著名期刊Journal of Ethnopharmacology (IF=5.4，Q2區(qū))在線發(fā)表。文章第一作者：易夢琴、張正朗，通訊作者：聶紅教授，通訊單位：暨南大學(xué)藥學(xué)院。

成果簡介

研究表明，疼痛影響著全世界30%的人群，不但影響著人們的身心健康，而且給社會造成了較大的經(jīng)濟(jì)負(fù)擔(dān)。慢性疼痛分為傷害性疼痛、炎癥性疼痛和神經(jīng)病理性疼痛（Neuropathic pain，NPP），NPP通常由中樞或周圍神經(jīng)系統(tǒng)損傷引起，在一般人群中發(fā)生率高達(dá)10%。然而，加巴噴丁和三環(huán)抗抑郁藥等一線藥物具有諸多副作用。因此，NPP的深入研究和藥物開發(fā)迫在眉睫。

重樓（Paris polyphylla）是多葉百合屬植物重樓的干燥根莖，具有清熱解毒、消腫止痛、涼肝定驚的功效，是著名中成藥云南白藥、神農(nóng)鎮(zhèn)痛膏等的重要組成藥物之一，現(xiàn)代研究亦表明重樓醇提物在鎮(zhèn)痛中具有治療潛力。暨南大學(xué)藥學(xué)院聶紅教授團(tuán)隊聚焦重樓中具體發(fā)揮鎮(zhèn)痛藥效的成分以及作用機(jī)制研究，在揭示了重樓的主要活性成分——重樓皂苷VI及其改善炎癥性疼痛的基礎(chǔ)上，進(jìn)一步探索重樓皂苷VI對NPP的鎮(zhèn)痛及作用機(jī)制研究，相關(guān)成果以“PolyphyllinVI alleviates the spared nerve injury-induced neuropathic pain based on P2X3 receptor-mediated the release of inflammatory mediators”為題，在國際藥理學(xué)研究著名期刊Journal of Ethnopharmacology (IF=5.4，Q2區(qū))在線發(fā)表。相關(guān)研究為中藥中活性成分的鑒定提供了思路，也為新型鎮(zhèn)痛藥物的開發(fā)提供了藥理學(xué)支持。

全文速覽

本研究首先利用網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)對重樓皂苷VI治療NPP的潛在靶點及機(jī)制進(jìn)行探索，隨后通過構(gòu)建SNI小鼠模型，利用行為學(xué)發(fā)現(xiàn)重樓皂苷VI顯著降低SNI小鼠的機(jī)械痛及熱痛敏化，證明其具有顯著的緩解NPP的效果。隨后利用免疫組化和Western blot等技術(shù)發(fā)現(xiàn)重樓皂苷Ⅵ顯著抑制SNI小鼠DRG和脊髓中P2X3受體的表達(dá)及炎癥因子的釋放。通過RNA測序發(fā)現(xiàn)上述作用可能與AMPK信號通路相關(guān)，隨后也觀察到重樓皂苷Ⅵ治療后SNI小鼠p-AMPK的上調(diào)及p-P65-NF-κB的下調(diào)。綜上，重樓皂苷Ⅵ可能通過抑制P2X3受體的表達(dá)和炎癥介質(zhì)的釋放改善SNI小鼠的痛覺敏化，該作用可能與AMPK/ NF-κB通路有關(guān)。

圖文導(dǎo)讀

網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)發(fā)現(xiàn)重樓皂苷Ⅵ與NPP共有56個共有靶點，其中BCL2, CASP3, JUN, STAT3, and TNF位于網(wǎng)絡(luò)的核心，可能是重樓皂苷Ⅵ治療NPP的關(guān)鍵。KEGG結(jié)果發(fā)現(xiàn)，這些共有靶點主要集中在PI3K- Akt和 AMPK 等信號通路。

后續(xù)通過建立SNI小鼠模型，發(fā)現(xiàn)重樓皂苷Ⅵ顯著增加模型小鼠的機(jī)械痛閾值和熱痛閾值，后續(xù)利用免疫組化及Western blot發(fā)現(xiàn)重樓皂苷VI可顯著降低SNI小鼠DRG及脊髓中P2X3受體的表達(dá)，而P2X3受體是維持慢性疼痛及痛覺敏化的關(guān)鍵。

HE染色結(jié)果表明重樓皂苷Ⅵ降低SNI小鼠DRG及脊髓中炎癥細(xì)胞的數(shù)量，改善神經(jīng)元的固縮和空泡化，對TNF-α、IL-1β 和 IL-6進(jìn)行檢測發(fā)現(xiàn)，重樓皂苷Ⅵ顯著降低DRG和脊髓中炎癥因子的表達(dá)。

隨后利用RNA測序?qū)χ貥窃碥闸鼍徑釴PP的機(jī)制進(jìn)行探究，共發(fā)現(xiàn)104個差異基因，差異基因的KEGG結(jié)果主要富集在AMPK信號通路，該結(jié)果與上述網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)一致。另外有研究表明，AMPK信號通路的激活抑制經(jīng)炎癥通路NF-κB，因此，AMPK/NF-κB作為潛在信號通路進(jìn)行后續(xù)的實驗驗證。

Western blot結(jié)果顯示，SNI小鼠與對照組相比，DRG中AMPK磷酸化水平降低而P65 NF-κB磷酸化水平升高。重樓皂苷Ⅵ的干預(yù)提高了AMPK的磷酸化水平并抑制了P65 NF-κB的磷酸化，提示重樓皂苷Ⅵ可能通過AMPK/NF-κB通路發(fā)揮鎮(zhèn)痛作用。

小結(jié)

本研究利用網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)、分子生物學(xué)、RNA測序等手段，揭示了重樓皂苷Ⅵ治療NPP的關(guān)鍵靶點及機(jī)制。通過構(gòu)建SNI慢性疼痛小鼠模型，利用行為學(xué)觀察到重樓皂苷Ⅵ可以改善痛覺敏化，具有顯著的鎮(zhèn)痛作用。進(jìn)一步研究發(fā)現(xiàn)重樓皂苷Ⅵ可抑制SNI小鼠DRG及脊髓中P2X3受體的表達(dá)，改善DRG和脊髓中炎性浸潤、神經(jīng)元的凋亡和空泡化，并且抑制炎癥因子TNF-α、IL-1β 和 IL-6的釋放，可能的機(jī)制是激活A(yù)MPK信號通路從而抑制NF-κB通路介導(dǎo)的炎癥反應(yīng)。

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